產(chǎn)品貨號(hào)：ZH-TG-002      規(guī)格：200μl*20

產(chǎn)品特點(diǎn)

  1．TG1 來源于 E. coli K-12 菌株,，是目前生長(zhǎng)速度最快的克隆用大腸桿菌菌株之一,，在平板上37℃,，7 h 可見克隆。 
  2．菌株不含核酸酶 endA1 突變,，體內(nèi)核酸酶含量較高,，提取質(zhì)粒時(shí)推薦使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液以去除菌體內(nèi)大量的核酸酶。
  3．lacIqlacZΔM15 的存在使 TG1 可以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選,。

  4．pUC19 質(zhì)粒檢測(cè),，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 2×10^10 cfu/ug DNA。

使用說明

  1．取 0.2cm 電擊杯于冰中,，冰浴 5 分鐘充分降溫,。
  2．取 200 μl 感受態(tài)細(xì)胞置于冰中 5 分鐘，待感受態(tài)細(xì)胞融化后,，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的 DNA,，用移液器輕柔吹打混勻,，避免產(chǎn)生氣泡，混勻后立即插入冰中,。
   A．測(cè)定轉(zhuǎn)化效率使用 10ng/μl 的對(duì)照質(zhì)粒 PUC19,。
   B．對(duì)于連接產(chǎn)物，請(qǐng)用一定的方法脫鹽后加入感受態(tài)中,，DNA 濃度不超過 100ng/μl,，體積不超過15μl /200μl 感受態(tài)。
  3．用 200μl 槍頭將感受態(tài)-DNA 混合液快速轉(zhuǎn)移至電擊杯中,，避免產(chǎn)生氣泡,，蓋好杯蓋。
  4．啟動(dòng)電擊儀,，設(shè)置參數(shù)：C=25μF, PC=200Ω, V=2.5kV (此為 BioRad 電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù),，也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的參數(shù)操作)，將電擊杯表面水分充分擦干后快速放入電擊槽中進(jìn)行電擊,。
  5．電擊結(jié)束后快速取出電擊杯,，打開杯蓋，加入 1.5ml 不含抗生素的培養(yǎng)基,，用 1ml移液器輕柔吹打混勻后,，轉(zhuǎn)移至 200ml 不含抗生素的培養(yǎng)基中，重復(fù) 4-5 次,，直至電擊杯中的感受態(tài)全部轉(zhuǎn)移至200ml培養(yǎng)基中,。
  6．將 200ml 含菌液的培養(yǎng)基放入搖床，37℃,，90rpm 復(fù)蘇 60 分鐘,。 
  7．復(fù)蘇后，從 200ml 菌液中取 4ml 用于梯度稀釋,，涂布于含抗生素的固體培養(yǎng)基平板上,，倒置放于 37℃培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng) 13-17 小時(shí)。

  8．剩余的菌液補(bǔ)加抗生素和終濃度 2%葡萄糖后放入搖床,，37℃,，220rpm 培養(yǎng)至 OD600＞3.5，進(jìn)行離心濃縮收菌,。 

注意事項(xiàng)

  1．加入 DNA 時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的 1/10,。 
  2．電擊感受態(tài)細(xì)胞加入電擊杯應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會(huì)增加弧光放電風(fēng)險(xiǎn),。 
  3. 當(dāng) DNA 不純或存在鹽,、乙醇、蛋白及緩沖液等污染時(shí),，轉(zhuǎn)化效常急劇下降,。 
  4. 電擊杯里的離子可增加溶液的電導(dǎo),，增大在含有細(xì)胞和 DNA 的溶液中產(chǎn)生電流和弧光放電的風(fēng)險(xiǎn)。
  5. 若轉(zhuǎn)化大質(zhì)?；蛳氆@得較高轉(zhuǎn)化效率,，推薦使用高純質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒，質(zhì)粒增大一倍,，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí),。 
  6. 對(duì)于連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，保證 DNA 濃度不超過 100 ng/μl,。過高濃度連接產(chǎn)物或過大體積連接產(chǎn)物會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率,，增加弧光放電的風(fēng)險(xiǎn)。 
  7．混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作,，吸取感受態(tài)細(xì)胞時(shí)避免用力過猛,，以免剪切力過大損傷細(xì)胞膜，降低轉(zhuǎn)化效率,。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。 
  8．電擊后的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基的過程應(yīng)輕柔操作,，避免用力過猛損傷細(xì)胞,。

  9．電擊感受態(tài)細(xì)胞最好保存在-80°C 以下，高于-80°C 超期儲(chǔ)存會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率下降,。

保存條件

-80℃保存,，干冰運(yùn)輸。