重組蛋白G磁珠(rProtein G Magnetic Beads)本產品將重組Protein G高密度氨基偶聯(lián)到磁性瓊脂糖微球表面,具有高載量,,高特異性,,高回收率和低非特異吸附的特性??山Y合293/CHO細胞培養(yǎng)上清,、雜交瘤細胞上清、小鼠腹水和血清等樣本中的IgG或帶有FC標簽的重組蛋白,。重組Protein G只保留了C1,,C2和C3三個抗體特異結合的結構域,降低了非特異性吸附,,因此通過一步結合和洗脫即可得到純度大于90%的目的蛋白,。Protein G可用于純化不能與Protein A很好結合的哺乳動物IgG,。相對于Protein A,,Protein G對于大多數哺乳動物的IgG有著更高的親和力,尤其是對于人 IgG3,,小鼠IgG1和大鼠 IgG2a,。
Protein A和Protein G與不同來源及亞類的免疫球蛋白結合能力不一樣,具體可根據目標抗體的種屬來源及亞型選擇磁珠的類別,。
磁珠密度 | 0.95-1.05 g/mL純磁珠 |
磁珠濃度 | 380-580個/mg純磁珠 |
磁響應速度 | ≤ 45 s |
粒徑 | 20-80um |
偶聯(lián)方式 | 氨基偶聯(lián) |
載量 | hIgG≥50 mg/ml(100%磁珠) |
保存緩沖液 | 20%乙醇 |
保存溫度 | 2-8℃ |
產品名稱 | 試劑名稱 | 規(guī)格 | 數量 | 保存條件 |
rProtein G Magnetic Beads | 10% v/v磁珠 | 10ml | 1 | 2-8℃ |
10% v/v磁珠 | 50ml | 1 | 2-8℃ |
本產品須與磁性分離設備配套使用
磁珠使用前要混合震蕩均勻
磁珠預處理要充分
孵育時要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),,以保持最大結合效率
在使用及保存磁珠過程中,禁止磁珠長時間干燥
禁止冷凍,,離心磁珠,,防止對磁珠產生不可逆的損傷
建議磁珠僅重復純化同種蛋白
應避免磁珠因磁吸不完全導致的磁珠損耗
用后及時再生,避免將磁珠長時間置于低pH的緩沖液中,,避免磁珠長菌
(以純化1ml小鼠腹水為例,,目標抗體約1-2mg)
用Wash Buffer將小鼠腹水稀釋3-5倍,。(雜交瘤細胞培養(yǎng)上清可使用Wash Buffer調節(jié)pH至7.0-8.0。)
顛倒混勻磁珠,,吸取2mL 10%(v/v)磁珠于準備好的5ml EP管內,,
放置在磁力架上,靜置1min,,吸棄上清,;
加入與10%磁珠等體積的Wash Buffer 2ml(這里的等體積是指磁珠加保存液的總體積),取下EP管,,顛倒混勻1min,;
放置在磁力架上,靜置1min,,吸棄上清,;
重復1次。
將1ml小鼠腹水(pH7.0-8.0)用Wash Buffer稀釋3倍至4ml,,加入至裝有磁珠的EP管中,,顛倒混勻,室溫緩慢旋轉孵育1h(具體時間可根據結合效果調整),。
將裝有磁珠跟樣本的EP管放置在磁力架上,,靜置1min,吸棄上清,,加入與磁珠等體積的Wash Buffer(2ml),,顛倒混勻1min,靜置在磁力架1min,,吸棄上清,;
重復5次。
加入3-5倍磁珠體積(2ml 10% v/v磁珠的磁珠體積是200ul)的Elution Buffer(600ul),,室溫緩慢旋轉洗脫10min,;
靜置在磁力架上,吸走上清,,得到洗脫1,;
再加入3-5倍磁珠體積(2ml 10% v/v磁珠的磁珠體積是200ul)的Elution Buffer(600ul),室溫緩慢旋轉洗脫10min,;
靜置在磁力架上,,吸走上清,得到洗脫2,;
向洗脫的上清中加入1/10 Elution Buffer體積的Neutralization Buffer(60ul),。
分別測洗脫1和洗脫2的濃度,根據需要的抗體濃度決定是否混合。
(以再生2ml 10%v/v磁珠為例)
(1)將磁珠置于磁力架上,,吸棄上清,,向EP管內加入與10%磁珠等體積的Elution Buffer(2ml),室溫緩慢旋轉5min,,靜置在磁力架上,,吸棄上清;
(2)向EP管內加入與10%磁珠等體積的Wash Buffer(2ml),,再加入1%(v/v)TritionX-100,,室溫緩慢旋轉10min,靜置在磁力架上,,吸棄上清,;
(3)向EP管內加入與10%磁珠等體積的Wash Buffer(2ml),室溫緩慢旋轉2min,,靜置在磁力架上,,吸棄上清,重復一次,;
(4)向EP管內加入1.8ml 20%乙醇,,使磁珠的濃度保持在10% (v/v) ,4℃保存,。
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
rProtein A Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG101 |
rProtein A Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG102 |
rProtein G Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG201 |
rProtein G Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG202 |
Ni NTA Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG301 |
Ni NTA Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG302 |
Ni TED Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG401 |
Ni TED Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG402 |
重組蛋白和細胞因子 | 抗體 | 蛋白純化設備&磁珠 | 無血清細胞凍存液 | 感受態(tài)細胞 | 確定 |