耐堿蛋白A磁珠(ATPA Magnetic Beads) 本產(chǎn)品將重組耐堿蛋白A (Recombinant Alkali-Tolerant Protein A)高密度環(huán)氧基偶聯(lián)到磁性瓊脂糖微球表面,具有高載量,,高特異性,,高回收率,低非特異吸附和強(qiáng)耐堿性的特性,??山Y(jié)合293/CHO細(xì)胞培養(yǎng)上清、雜交瘤細(xì)胞上清,、小鼠腹水和血清等樣本中的IgG或帶有FC標(biāo)簽的重組蛋白,。重組ATPA只保留了Protein A中抗體特異結(jié)合的部分結(jié)構(gòu)域,與Protein A相比,,對(duì)樣品的純化效果幾乎不變,,但對(duì)堿的耐受性大大提升,在重復(fù)使用時(shí),,極大地降低了樣品交叉污染的風(fēng)險(xiǎn),。
磁珠的參數(shù)和指標(biāo)見Table 1,產(chǎn)品規(guī)格見 Table 2,,溶液配方見Table 3,。
磁珠密度 | 0.95-1.05 g/mL純磁珠 |
磁珠濃度 | 380-580個(gè)/mg純磁珠 |
磁響應(yīng)速度 | ≤ 45 s |
粒徑 | 20-80um |
ATPA偶聯(lián)方式 | 環(huán)氧基偶聯(lián) |
載量 | hIgG≥40 mg/ml(100%磁珠) |
保存緩沖液 | 20%乙醇 |
保存溫度 | 2-8℃ |
產(chǎn)品名稱 | 試劑名稱 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 保存條件 |
ATPA Magnetic Beads | 10% v/v磁珠 | 10ml | 1 | 2-8℃ |
10% v/v磁珠 | 50ml | 1 | 2-8℃ |
本產(chǎn)品須與磁性分離設(shè)備配套使用
磁珠使用前要混合震蕩均勻
磁珠預(yù)處理要充分
孵育時(shí)要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),以保持最大結(jié)合效率
在使用及保存磁珠過程中,,禁止磁珠長時(shí)間干燥
禁止冷凍,離心磁珠,,防止對(duì)磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷
建議磁珠僅重復(fù)純化同種蛋白
應(yīng)避免磁珠因磁吸不完全導(dǎo)致的磁珠損耗
用后及時(shí)再生,,避免將磁珠長時(shí)間置于低pH的緩沖液中,避免磁珠長菌
(以純化1ml小鼠腹水為例)
用Wash Buffer將小鼠腹水稀釋3-5倍,。(細(xì)胞培養(yǎng)上清可使用Wash Buffer調(diào)節(jié)pH至7.0-8.0,。)
顛倒混勻磁珠,吸取2mL 10%(v/v)磁珠于準(zhǔn)備好的5ml EP管內(nèi),,磁分離架收集磁珠并丟棄上清液,;
加入1.8ml的Wash Buffer,磁分離架收集磁珠并丟棄上清液,,重復(fù)2次,;
如有控內(nèi)毒的需要,請(qǐng)做下面兩個(gè)步驟:
加入1.8 ml 0.1M NaOH(Cleaning Buffer)孵育 15 分鐘。然后使用磁分離架收集磁珠并丟棄上清液,,重復(fù)此步驟1次,。
加入1.8ml的Wash Buffer,顛倒混勻1min,,磁分離架收集磁珠并丟棄上清液,,重復(fù)2次。
將1ml小鼠腹水(pH7.0-8.0)用Wash Buffer稀釋3倍至4ml,,加入至裝有磁珠的EP管中,,顛倒混勻,室溫緩慢旋轉(zhuǎn)孵育1h(具體時(shí)間可根據(jù)結(jié)合效果調(diào)整),。
將裝有磁珠跟樣本的EP管放置在磁力架上,,靜置1min,吸棄上清,,加入1.8ml Wash Buffer,,顛倒混勻1min,靜置在磁力架1min,,吸棄上清,;
重復(fù)5次。
加入3-5倍磁珠體積的Elution Buffer(600ul),,室溫緩慢旋轉(zhuǎn)洗脫5min,;
靜置在磁力架上,吸走上清,,得到洗脫1,;
再加入3-5倍磁珠體積的Elution Buffer(600ul),室溫緩慢旋轉(zhuǎn)洗脫5min,;
靜置在磁力架上,,吸走上清,得到洗脫2,;
向洗脫的上清中加入1/10 Elution Buffer體積的Neutralization Buffer(60ul),。
分別測洗脫1和洗脫2的濃度,根據(jù)需要的抗體濃度決定是否混合,。
(以再生2ml 10%v/v磁珠為例)
(1)將磁珠置于磁力架上,,吸棄上清,向EP管內(nèi)加入與1.8ml Elution Buffer,,室溫緩慢旋轉(zhuǎn)5min,,靜置在磁力架上,吸棄上清,;
(2)向EP管內(nèi)加入與1.8ml的Cleaning Buffer,,室溫緩慢旋轉(zhuǎn)15min,,靜置在磁力架上,吸棄上清,,重復(fù)此步驟1次;
(3)向EP管內(nèi)加入與1.8ml的Wash Buffer,,室溫緩慢旋轉(zhuǎn)2min,靜置在磁力架上,,吸棄上清,,重復(fù)一次;
(4)向EP管內(nèi)加入1.8ml 20%乙醇,,使磁珠的濃度保持在10% (v/v) ,,4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
rProtein A Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG101 |
rProtein A Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG102 |
rProtein G Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG201 |
rProtein G Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG202 |
Ni NTA Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG301 |
Ni NTA Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG302 |
Ni TED Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG401 |
Ni TED Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG402 |
ATPA Magnetic Beads | 10ml, 10%(v/v) | MG501 |
ATPA Magnetic Beads | 50ml, 10%(v/v) | MG502 |
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