磁珠的參數(shù)和指標(biāo)見Table 1，產(chǎn)品規(guī)格見 Table 2,。

Table 1：GSH磁珠參數(shù)和性能指標(biāo)

Table 2：產(chǎn)品規(guī)格

注意：GSH磁珠,，2-8℃ 保存，不要冷凍,，禁止磁珠在儲存和使用過程中變干,。

使用須知

本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用

磁珠使用前要混合震蕩均勻

磁珠預(yù)處理要充分

孵育時要保持磁珠處于懸浮狀態(tài)，以保持最大結(jié)合效率

在使用及保存磁珠過程中,，禁止磁珠長時間干燥

禁止冷凍,，離心磁珠，防止對磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷

建議磁珠僅重復(fù)純化同種蛋白

應(yīng)避免磁珠因磁吸不完全導(dǎo)致的磁珠損耗

用后及時再生,，避免將磁珠長時間置于低pH的緩沖液中,，避免磁珠長菌

應(yīng)用場景

適用于GST標(biāo)簽融合蛋白的純化，配備磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自動化蛋白純化工作站可同時處理1-96 個樣本。

使用方法

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

推薦緩沖液

操作步驟

以大腸桿菌表達(dá)的GST標(biāo)簽融合蛋白的純化為例

樣品處理

1) 將收集到的菌體,，加入適量體積的Binding buffer，加入蛋白酶抑制劑（如終濃度為

1mM 的PMSF）,；加入溶菌酶,，使終濃度為0.2-0.4mg/mL。

2) 將菌體懸浮起來,，置于冰上進(jìn)行超聲波破碎,，如果破碎后的樣本過于粘稠，可加入適

量核酸酶在冰上孵育30mins,，獲得的即為粗蛋白樣品,。

磁珠預(yù)處理

1) 磁珠的使用量可根據(jù)目標(biāo)蛋白產(chǎn)量來計(jì)算，磁珠使用量可稍過量,，如目標(biāo)蛋白預(yù)估產(chǎn)

量為5mg,，則加入5-10mL（20%，v/v）磁珠,。

2) 磁珠平衡：將磁珠充分渦旋混勻,，然后立即取出所需磁珠加入到離心管中，置于磁力

架上磁吸,，吸棄上清液,；加入與懸浮磁珠等體積的Binding buffer，渦旋15s,，然后置于磁

力架上磁吸,，澄清后，可翻轉(zhuǎn)離心管（保持離心管在磁力架上）,，使離心管蓋上殘留的磁

珠潤洗下來,，待上清澄清后去掉上清液，重復(fù)洗滌2 次,。

結(jié)合

將粗蛋白樣品加入到上述平衡后的磁珠管中,，蓋上管蓋，將磁珠置于旋轉(zhuǎn)混勻儀上室

溫混合20-30mins（如有需要,，也可于2-8℃下旋轉(zhuǎn)混合1h）,。

漂洗

1) 將上述離心管置于磁力架上，待上清澄清后,，吸取上清液至新的離心管中以備檢測,。

2) 加入等體積的Wash buffer 重懸磁珠，吹打5-10 次或旋轉(zhuǎn)2mins，然后將離心管置于

磁力架上,，上清澄清后,，吸取上清液到新的離心管中以備檢測，重復(fù)該洗滌步驟至少2 次,。

洗脫

1) 根據(jù)需要,，加入適量的Elution Buffer 于磁珠管中，吹打混勻后,，將離心管置于旋轉(zhuǎn)

儀上混合5-10mins,；

2) 將離心管置于磁力架上，待上清澄清,，吸取上清液保存?zhèn)溆?；如有需要,，可重?fù)該步

驟一次,，收集樣品到新的離心管中，以檢測目標(biāo)蛋白是否完全洗脫,。

磁珠保存

1) 向磁珠中加入Elution Buffer,，渦旋震蕩30s，然后磁吸去上清,，共洗滌3 次,；

2) 向磁珠中加入4 倍磁珠體積的20%乙醇，置于2-8℃保存,。

流程優(yōu)化

上述流程為推薦流程,，根據(jù)目標(biāo)蛋白的不同，可從以下幾個方面進(jìn)行流程上的優(yōu)化,，

以獲得更高的回收率和純度,。

1) 調(diào)整粗蛋白濃度，如蛋白濃度過低,，則不利于蛋白的回收,；

2) 調(diào)整磁珠用量、孵育時間,、洗脫時間,、洗脫次數(shù)等；

3) 緩沖液中加入1~10mM 的DTT,，有利于部分GST 標(biāo)簽蛋白與磁珠的結(jié)合,；

4) 緩沖液中加入0.05%的Tween-20 可降低磁珠和離心管對非特異蛋白的吸附。