磁珠的參數(shù)和指標(biāo)見Table 1，產(chǎn)品規(guī)格見 Table 2,。

Table 1：重組蛋白 L磁珠參數(shù)和性能指標(biāo)

Table 2：產(chǎn)品規(guī)格

注意：重組蛋白 L磁珠,，2-8℃ 保存，不要冷凍，禁止磁珠在儲(chǔ)存和使用過程中變干,。

使用須知

本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用

磁珠使用前要混合震蕩均勻

磁珠預(yù)處理要充分

孵育時(shí)要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),，以保持最大結(jié)合效率

在使用及保存磁珠過程中，禁止磁珠長(zhǎng)時(shí)間干燥

禁止冷凍,，離心磁珠,，防止對(duì)磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷

建議磁珠僅重復(fù)純化同種蛋白

應(yīng)避免磁珠因磁吸不完全導(dǎo)致的磁珠損耗

用后及時(shí)再生，避免將磁珠長(zhǎng)時(shí)間置于低pH的緩沖液中,，避免磁珠長(zhǎng)菌

應(yīng)用場(chǎng)景

知禾泰克重組蛋白 L磁珠專為高通量抗體純化開發(fā),，應(yīng)用場(chǎng)景包括重組抗體培養(yǎng)基條件優(yōu)化篩選，重組抗體表達(dá)條件的優(yōu)化篩選,，雜交瘤抗體篩選,，腹水抗體純化，重組抗體活性評(píng)價(jià)和穩(wěn)定細(xì)胞株篩選等,。

使用方法

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

推薦緩沖液:

操作步驟

以純化人血清為例,，具體操作如下：

樣品處理

取人血清100μL (一般血清樣品中抗體含量約2-8mg/mL)至1.5mL 離心管中,，加入900μL Binding/Washing buffer，充分混勻,。

磁珠預(yù)處理

1）充分混勻磁珠后,，取200μL 磁珠懸液到2mL 離心管中，磁性分離,，棄上清,；

2）加入1mL Binding/Washing Buffer 于離心管中，反復(fù)顛倒3-5 次使磁珠充分重懸,，磁性分離,，棄上清；該步驟重復(fù)一次,。

注：磁珠的用量可根據(jù)磁珠對(duì)目標(biāo)抗體的最大結(jié)合量進(jìn)行調(diào)節(jié),，可根據(jù)磁珠的抗體結(jié)合能力計(jì)算磁珠的大概用量，建議磁珠用量應(yīng)為目標(biāo)抗體含量的1.2-1.5 倍,。

結(jié)合

在處理好的磁珠管中加入步驟4.1 處理的樣品溶液,，振蕩均勻，在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手動(dòng)輕輕翻轉(zhuǎn),，使樣品和磁珠充分接觸混合結(jié)合15mins,，進(jìn)行磁性分離，棄上清,。

漂洗

加入1mL 的Binding/Washing Buffer 于離心管中,，反復(fù)顛倒3-5 次使磁珠充分重懸,，磁性分離，棄上清,；再重復(fù)該步驟2 次,。

洗脫

1) 加入0.5-1mL Elution Buffer，室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手動(dòng)輕輕翻轉(zhuǎn)10mins,，置于磁力架上進(jìn)行磁性分離,，收集洗脫液到新的離心管中，即為純化的目標(biāo)抗體,；

2) 若需要,，可重復(fù)上述步驟，收集洗脫液至新離心管中,，以檢測(cè)目標(biāo)抗體是否完全洗脫（Elution Buffer 用量建議最終洗脫抗體濃度在0.5-1.2mg/mL,，以確保一次洗脫可將95%以上的目標(biāo)抗體被洗脫下來，用量過少會(huì)導(dǎo)致洗脫后仍有部分抗體殘留于磁珠上）,。

中和

在以上含抗體的洗脫液中加入1/10 抗體洗脫體積的Neutrilization buffer,，混勻使其pH值保持在中性環(huán)境下，以維持抗體的生物活性,，避免失活,。

磁珠后處理

1) 向裝有磁珠的離心管中加入1mL Elution Buffer，渦旋震蕩5s,，磁性分離棄上清,。重復(fù)操作2 次；

2) 加入1mL Binding/Washing buffer,，渦旋5s，磁性分離棄上清,；重復(fù)操作2 次,；

3) 加入Storage buffer 重懸磁珠，置于2-8℃保存,。

磁珠再生

磁珠多次使用后會(huì)有沉淀蛋白,、強(qiáng)疏水性蛋白、脂蛋白等雜質(zhì)非特異性吸附到磁珠上,，為了保證磁珠的使用效率,，建議持續(xù)使用5 次后進(jìn)行磁珠再生處理。

1) 約每1 mL（10mg/mL）磁珠加入1 mL（1%,，v/v）Triron X-100 磁珠再生緩沖液,，振蕩均勻，在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手動(dòng)翻轉(zhuǎn)混合10 mins 后進(jìn)行磁性分離,，棄上清,；

2) 加入1 mL Binding/Washing buffer 進(jìn)行重懸,，磁性分離，棄上清,，重復(fù)該操作3 次,；

3) 加入1 mL Storage buffer 重懸磁珠，置于2-8℃保存,。

流程優(yōu)化

磁珠與抗體的的結(jié)合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關(guān),，請(qǐng)確認(rèn)抗體的類型與Protein L 配基的親和效率（附表）：

1．抗體所屬亞型與Protein L 的親和度較低：a. 增加抗體與磁珠的孵育時(shí)間（30-120mins）；b. 提高結(jié)合緩沖液的pH 值（8-9）,；c. 降低離子強(qiáng)度（25-100 mM NaCl）等方法提高親和效率,；d. 選擇與目標(biāo)抗體具有更高親和度的配基（如Protein G 或Protein A）。

2．抗體與Protein L 配基親和度太高導(dǎo)致抗體洗脫效率低：a．降低洗脫緩沖液的pH 值1.9-2.5,；b．增大洗脫緩沖液的離子強(qiáng)度（可選用2-3 M MgCl2）,；c．延長(zhǎng)洗脫時(shí)間，提高洗脫效率,。

附表