磁珠的參數(shù)和指標(biāo)見Table 1,，產(chǎn)品規(guī)格見 Table 2,。

Table 1：Strep Tactin磁珠參數(shù)和性能指標(biāo)

Table 2：產(chǎn)品規(guī)格

注意：Strep Tactin磁珠,，2-8℃ 保存，不要冷凍,，禁止磁珠在儲存和使用過程中變干,。

使用須知

本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用

磁珠使用前要混合震蕩均勻

磁珠預(yù)處理要充分

孵育時要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),，以保持最大結(jié)合效率

在使用及保存磁珠過程中，禁止磁珠長時間干燥

禁止冷凍,，離心磁珠,，防止對磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷

建議磁珠僅重復(fù)純化同種蛋白

應(yīng)避免磁珠因磁吸不完全導(dǎo)致的磁珠損耗

用后及時再生，避免將磁珠長時間置于低pH的緩沖液中,，避免磁珠長菌

應(yīng)用場景

適用于Strep-Tag融合蛋白的純化,，配備磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自動化蛋白純化工作站可同時處理1-96 個樣本。

使用方法

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

推薦緩沖液:

操作步驟

樣品處理

本操作說明書提供以下常見樣品處理方法：

1) 菌體內(nèi)表達(dá)蛋白：菌體用適量的Binding Buffer 稀釋,，如實(shí)驗(yàn)需要,，可加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1mM PMSF)，重懸菌體,，冰浴超聲裂解菌體,，即為粗蛋白樣品。

2) 胞外表達(dá)蛋白：離心取上清液加入等量Binding Buffer 稀釋,，即為粗蛋白樣品,。

3) 動物細(xì)胞胞內(nèi)表達(dá)蛋白：收集細(xì)胞PBS 洗滌1 次后棄上清；接著用適量含1%(v/v)Triton X-100 或1% (v/v) NP-40 的Binding Buffer 重懸,，加入蛋白酶抑制劑(如1mM 的PMSF),，冰浴10mins，即為粗蛋白樣品,。

磁珠預(yù)處理

一般情況下,，磁珠的使用量是由使用者根據(jù)目標(biāo)蛋白產(chǎn)量和磁珠載量信息計(jì)算獲得。

1) 充分渦旋混勻后,，立即取適量磁珠懸液于離心管中,，然后將離心管置于磁分離器上，澄清后吸棄上清液,。

2) 加入等體積的Binding Buffer,，取下離心管后渦旋混勻10s，后置于磁分離器上,，澄清后吸棄上清液,，重復(fù)此操作1 次。

結(jié)合

1) 將5-10mL 粗蛋白樣品轉(zhuǎn)移到裝有已預(yù)處理磁珠的離心管中,，蓋緊離心管蓋,；

2) 將離心管渦旋震蕩15s 后將其置于旋轉(zhuǎn)混合儀上，旋轉(zhuǎn)混合30mins 或2-8℃混合1h,；

3) 混合結(jié)束后,，將其置于磁力架上，顛倒混合數(shù)次,，潤洗管壁和管蓋上的磁珠,，上清澄清后移去上清液到新的離心管中以備后續(xù)檢測,。

漂洗

向上述磁珠中加入5~10 mL Washing Buffer，漩渦混合2mins,，磁性分離,，移出清洗液到新的離心管中，以備取樣檢測,；重復(fù)操作該步驟,。

洗脫

向磁珠管中加入2~5 mL Elution Buffer（用戶可根據(jù)目標(biāo)蛋白濃度需求改變洗脫體積）于離心管中，蓋緊離心管蓋,，然后將離心管置于垂直混合儀上,，室溫垂直混合洗脫10mins；磁性分離,，收集洗脫液到新的離心管中,，即為純化的目標(biāo)蛋白樣品；

注：若需要可重復(fù)上述步驟1 次,，收集樣品到新離心管以檢測蛋白是否洗脫完全,。

磁珠保存和再生

NaOH 再生：洗脫后的磁珠按照以下順序進(jìn)行洗滌，5~10mL 純化水洗滌3 次,、5~10mL 0.5M NaOH 洗滌3 次,、純水洗滌至中性，加入10mL 保存液,，置于2~8℃保存,。

HABA 再生：用脫硫生物素洗脫目標(biāo)蛋白的磁珠還可以用HABA 緩沖液再生，加入5~10mL 1mM HABA 洗滌磁珠5 次,，接著用Binding Buffer 洗滌磁珠至磁珠本身顏色,，每

次洗滌5mins，最后加入10mL 保存液,，將磁珠放置2~8°C 保存,。

流程優(yōu)化

以上操作流程適用于大部分Strep-Tag II 標(biāo)簽蛋白的純化， 根據(jù)目標(biāo)蛋白與Strep-Tactin 蛋白純化磁珠的結(jié)合性能不同,，用戶可以從以下幾個方面對純化流程進(jìn)行優(yōu)化,，

以提高目標(biāo)蛋白的回收率和純度。

1）提高目標(biāo)蛋白回收率的參考方法：a．延長蛋白溶液與磁珠孵育的時間,；b．添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標(biāo)蛋白降解,；c．增加磁珠用量,；d．延長洗脫目標(biāo)蛋白的時間或

增加洗脫次數(shù)。

2）提高目標(biāo)蛋白純度的參考方法：a．在純化過程中添加合適的蛋白酶抑制劑,，防止目標(biāo)蛋白降解,；b．延長洗滌的時間,，增加洗滌次數(shù)。