磁珠的參數(shù)和指標見Table 1，產(chǎn)品規(guī)格見 Table 2,。

Table 1：抗HA磁珠參數(shù)和性能指標

Table 2：產(chǎn)品規(guī)格

注意：抗HA磁珠，2-8℃ 保存,，不要冷凍,，禁止磁珠在儲存和使用過程中變干,。

使用須知

本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用

磁珠使用前要混合震蕩均勻

磁珠預(yù)處理要充分

孵育時要保持磁珠處于懸浮狀態(tài)，以保持最大結(jié)合效率

在使用及保存磁珠過程中,，禁止磁珠長時間干燥

禁止冷凍,，離心磁珠，防止對磁珠產(chǎn)生不可逆的損傷

建議磁珠僅重復(fù)純化同種蛋白

應(yīng)避免磁珠因磁吸不完全導(dǎo)致的磁珠損耗

使用本產(chǎn)品進行IP 實驗前,，需先確認樣品中HA 融合蛋白的表達情況

在進行細胞或菌體裂解時不要使用含DTT的裂解液,，防止造成磁珠上Anti-HA 抗體脫落

應(yīng)用場景

適用于HA-tag融合蛋白的純化，配備磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自動化蛋白純化工作站可同時處理1-96 個樣本,。

使用方法

實驗前準備

推薦緩沖液:

操作步驟

樣品處理

樣品可以是細菌發(fā)酵液或者細胞裂解液,，裂解完成后樣品溶液中不能含有顆粒不溶物，可以用0.22μm 濾膜過濾或10,000×g 離心15mins,。

磁珠預(yù)處理

充分混勻Anti-HA 磁珠,，取10-25μL 磁珠懸液，置于1.5mL EP 管中,，加入500μL

結(jié)合/清洗緩沖液,，充分混懸后置磁力架上磁性分離棄上清。重復(fù)該操作2 次,。

結(jié)合

在清洗后的磁珠懸液中加入500μL 細胞裂解液,，充分混懸，置于翻轉(zhuǎn)混合儀孵育,，室溫孵育2 小時或者4°C 條件下孵育過夜,。置于磁力架上磁性分離，棄上清,。

漂洗

在上述分離得到的磁珠中加入1mL 洗滌緩沖液,，充分混懸磁珠，磁性分離,，棄上清,。重復(fù)該操作3 次。

洗脫

根據(jù)下游用途,，本說明提供三種洗脫方法：

a. 變性洗脫法：

如需直接檢測目的蛋白,，則在上述洗滌過的蛋白-磁珠復(fù)合物中加入50μL 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液，煮沸5mins,，冷卻至室溫后進行磁性分離取上清進行SDS-PAGE 檢測,。

b. 酸性洗脫法：

向洗滌過的蛋白-磁珠復(fù)合物中加入50μL 的洗脫液A 混合均勻， 室溫震蕩混10mins,。分離磁珠,，收集上清至新EP 管，按洗脫液:中和液=5:1 的比例加入中和液,，調(diào)節(jié)洗脫液pH 至中性,。

c. 競爭性洗脫法：

向洗滌過的蛋白-磁珠復(fù)合物中加入50μL 的洗脫液A 混合均勻,，室溫孵育1 小時或者4°C 條件下孵育2-4h。分離磁珠,，收集上清至新EP 管,，即為目的蛋白。

注：可重復(fù)洗脫步驟以獲得更高的回收率