磁珠的參數(shù)和指標見Table 1，產品規(guī)格見 Table 2,。

Table 1：Strep Tactin磁珠參數(shù)和性能指標

Table 2：產品規(guī)格

注意：Strep Tactin磁珠,，2-8℃ 保存,，不要冷凍，禁止磁珠在儲存和使用過程中變干,。

使用須知

本產品須與磁性分離器配套使用

磁珠使用前要混合震蕩均勻

磁珠預處理要充分

孵育時要保持磁珠處于懸浮狀態(tài),，以保持最大結合效率

在使用及保存磁珠過程中,，禁止磁珠長時間干燥

禁止冷凍，離心磁珠,，防止對磁珠產生不可逆的損傷

建議磁珠僅重復純化同種蛋白

應避免磁珠因磁吸不完全導致的磁珠損耗

用后及時再生,，避免將磁珠長時間置于低pH的緩沖液中，避免磁珠長菌

應用場景

適用于Strep-Tag融合蛋白的純化,，配備磁力架或者知禾泰克PP系列高通量自動化蛋白純化工作站可同時處理1-96 個樣本,。

使用方法

實驗前準備

推薦緩沖液:

操作步驟

樣品處理

本操作說明書提供以下常見樣品處理方法：

1) 菌體內表達蛋白：菌體用適量的Binding Buffer 稀釋，如實驗需要,，可加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1mM PMSF),，重懸菌體，冰浴超聲裂解菌體,，即為粗蛋白樣品,。

2) 胞外表達蛋白：離心取上清液加入等量Binding Buffer 稀釋，即為粗蛋白樣品,。

3) 動物細胞胞內表達蛋白：收集細胞PBS 洗滌1 次后棄上清；接著用適量含1%(v/v)Triton X-100 或1% (v/v) NP-40 的Binding Buffer 重懸,，加入蛋白酶抑制劑(如1mM 的PMSF),，冰浴10mins，即為粗蛋白樣品,。

磁珠預處理

一般情況下,，磁珠的使用量是由使用者根據目標蛋白產量和磁珠載量信息計算獲得。

1) 充分渦旋混勻后,，立即取適量磁珠懸液于離心管中,，然后將離心管置于磁分離器上，澄清后吸棄上清液,。

2) 加入等體積的Binding Buffer,，取下離心管后渦旋混勻10s，后置于磁分離器上,，澄清后吸棄上清液,，重復此操作1 次。

結合

1) 將5-10mL 粗蛋白樣品轉移到裝有已預處理磁珠的離心管中,，蓋緊離心管蓋,；

2) 將離心管渦旋震蕩15s 后將其置于旋轉混合儀上，旋轉混合30mins 或2-8℃混合1h,；

3) 混合結束后,，將其置于磁力架上，顛倒混合數(shù)次,，潤洗管壁和管蓋上的磁珠,，上清澄清后移去上清液到新的離心管中以備后續(xù)檢測,。

漂洗

向上述磁珠中加入5~10 mL Washing Buffer，漩渦混合2mins,，磁性分離,，移出清洗液到新的離心管中，以備取樣檢測,；重復操作該步驟,。

洗脫

向磁珠管中加入2~5 mL Elution Buffer（用戶可根據目標蛋白濃度需求改變洗脫體積）于離心管中，蓋緊離心管蓋,，然后將離心管置于垂直混合儀上,，室溫垂直混合洗脫10mins；磁性分離,，收集洗脫液到新的離心管中,，即為純化的目標蛋白樣品；

注：若需要可重復上述步驟1 次,，收集樣品到新離心管以檢測蛋白是否洗脫完全,。

磁珠保存和再生

NaOH 再生：洗脫后的磁珠按照以下順序進行洗滌，5~10mL 純化水洗滌3 次,、5~10mL 0.5M NaOH 洗滌3 次,、純水洗滌至中性，加入10mL 保存液,，置于2~8℃保存,。

HABA 再生：用脫硫生物素洗脫目標蛋白的磁珠還可以用HABA 緩沖液再生，加入5~10mL 1mM HABA 洗滌磁珠5 次,，接著用Binding Buffer 洗滌磁珠至磁珠本身顏色,，每

次洗滌5mins，最后加入10mL 保存液,，將磁珠放置2~8°C 保存,。

流程優(yōu)化

以上操作流程適用于大部分Strep-Tag II 標簽蛋白的純化， 根據目標蛋白與Strep-Tactin 蛋白純化磁珠的結合性能不同,，用戶可以從以下幾個方面對純化流程進行優(yōu)化,，

以提高目標蛋白的回收率和純度。

1）提高目標蛋白回收率的參考方法：a．延長蛋白溶液與磁珠孵育的時間,；b．添加合適的蛋白酶抑制劑,，防止目標蛋白降解；c．增加磁珠用量,；d．延長洗脫目標蛋白的時間或

增加洗脫次數(shù),。

2）提高目標蛋白純度的參考方法：a．在純化過程中添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標蛋白降解；b．延長洗滌的時間,，增加洗滌次數(shù),。